Testování klíšťat na virus klíšťové encefalitidy a borrelie

Studie je zaměřena na identifikaci genetického materiálu původců klíšťové encefalitidy a systémové klíšťové boreliózy (lymská borelióza) u zkoumaných klíšťat. Slouží pro včasnou diagnostiku onemocnění, urgentní specifickou prevenci a cílenou patogenetickou léčbu.

Jaké testy jsou součástí tohoto komplexu:

• Virus klíšťové encefalitidy (TBEV), RNA
• Borrelia burgdorferi sl, DNA

Ruská synonyma

Ixodid klíště; klíšťová encefalitida; virus klíšťové encefalitidy; systémová klíšťová borelióza (Lymeova choroba), klíšťová meningopolyneuritida, klíšťová borelióza, ixodidová borelióza, chronický migrační erytém, erytémová spirochetóza, Bannowartův syndrom.

Synonyma Anglicky

Ixodes klíště; klíšťová encefalitida; virus klíšťové encefalitidy; borelióza přenášená klíšťaty (lymská borelióza); Borrelia burgdorferi.

Metoda výzkumu

Polymerázová řetězová reakce (PCR).

Jaký biomateriál lze použít pro výzkum?

Obecné informace o studiu:

Klíšťová encefalitida je virové přirozené fokální přenosné onemocnění charakterizované převládajícím poškozením centrálního nervového systému. Původcem onemocnění je RNA virus patřící do rodu Flavivirus z čeledi Togaviridae, skupina Arboviruses. Infekce má sezónní (jaro-léto) charakter a přenáší se zejména kousnutím klíštěte nebo rozdrcením zapuštěného hmyzu, nutriční přenos je možný i infikovaným syrovým mlékem krav a koz. Hlavním rezervoárem a přenašečem viru jsou klíšťata Ixodes persulcatus a Ixodes ricinus. Dalšími rezervoáry viru jsou hlodavci, divoká zvířata a ptáci. K infekci klíšťaty dochází kousnutím a sáním krve infikovaných zvířat. V tomto případě virus proniká do orgánů a tkání klíštěte, zejména do slinného aparátu, střev a pohlavního aparátu, a přetrvává po celou dobu života hmyzu. Původce klíšťové encefalitidy se dělí na tři poddruhy: dálněvýchodní, středoevropský a sibiřský.

Inkubační doba onemocnění trvá od 3 do 21 dnů, v průměru 10-14 dnů. Klinické projevy jsou různé. Počáteční fáze onemocnění je charakterizována horečkou, bolestmi hlavy, myalgií, případně nevolností, zvracením a světloplachostí. Dále se rozvíjí fáze neurologických poruch, kdy dochází k poškození centrálního a periferního nervového systému. Podle závažnosti neurologických poruch se rozlišují tyto formy onemocnění: febrilní, meningeální, meningoencefalitická, meningoencefalopoliomyelitida a polyradikuloneuritická, dvouvlnná meningoencefalitida. Podle závažnosti se infekce může vyskytovat v mírné, středně těžké nebo těžké formě, která ovlivňuje dobu trvání onemocnění, závažnost klinických příznaků a varianty výsledku onemocnění. V konečné fázi onemocnění může být pozorováno uzdravení s vymizením neurologických příznaků, chronicizace patologického procesu nebo úmrtí pacientů. Možný dlouhodobý latentní přenos viru, perzistence nebo chronická forma infekce.

Systémová borelióza přenášená klíšťaty neboli lymská borelióza je přirozené fokální onemocnění přenášené vektory způsobené gramnegativní bakterií Borrelia burgdorferi z čeledi Spirochaetaceae. K nákaze člověka může dojít po přisátí klíšťat ixodidů, naočkování borelií klíšťovými slinami nebo rozdrcením dotěrného hmyzu, možný je i transplacentární přenos patogenu z matky na plod. Hlavním „rezervoárem“ a nositelem viru jsou klíšťata Ixodes persulcatus, Ixodes ricinus, Ixodes scapularis. Nejčastěji se infekce vyskytuje v jarním a letním období, kdy jsou klíšťata aktivní.

Inkubační doba onemocnění může trvat od 3 do 32 dnů, podle některých autorů až 60 dnů. Klíšťová borelióza má různé klinické projevy. V první fázi onemocnění je zaznamenána fáze lokální infekce, horečka, intoxikace, bolesti hlavy, rozšířený „migrační“ erytém v místě kontaktu klíštěte s kůží pacienta a regionální lymfadenitida. Během fáze hematogenní a lymfogenní diseminace borelií je pozorováno poškození orgánů a systémů s rozvojem pestrého klinického obrazu onemocnění. Je zaznamenáno poškození muskuloskeletálního, nervového, kardiovaskulárního systému, očí, jater, ledvin a kůže. V tomto případě se rozvíjí klinický obraz neuritidy, radikulitidy, encefalitidy, artritidy, konjunktivitidy, myokarditidy a mimo místo kousnutí klíštěte se objeví vyrážka. S progresí onemocnění, jeho komplikacemi a předčasnou aplikací léčby se mohou rozvinout následující procesy: neurologické poruchy ve formě meningitidy, meningoencefalitidy, encefalitidy a encefalomyelitidy, těžké poškození srdce, recidivující a/nebo chronické artritidy. Je možné vyvinout kontinuální nebo opakující se průběh onemocnění, chronické formy poškození nervového systému.

Vzhledem k tomu, že hlavním „rezervoárem“ a přenašečem klíšťové encefalitidy a systémové klíšťové boreliózy jsou klíšťata ixodidová, využívá se v laboratorní diagnostice a identifikaci původců těchto onemocnění přímé vyšetření klíšťat. Je možné vyšetřovat vzorky klíšťat z přirozených ložisek jejich rozšíření za účelem identifikace přítomnosti patogenů, stanovení procenta infikovaných klíšťat ve zkoumaných oblastech a kvantitativního obsahu viru v případě klíšťové encefalitidy. Jednotlivé exempláře klíšťat je nutné studovat při kousnutí člověka, inokulaci viru nebo borelií klíšťovými slinami nebo při rozdrcení zapuštěného hmyzu. To je důležité pro stanovení možné infekce klíštětem, včasnou diagnostiku onemocnění, urgentní specifickou prevenci a cílenou patogenetickou léčbu.

Charakteristickým rysem metody PCR je schopnost detekovat genetický materiál, i když je jeho obsah ve studovaném biologickém materiálu nízký. Tyto metody umožňují rychle zjistit přítomnost či nepřítomnost infekce klíšťat virem klíšťové encefalitidy a/nebo původcem klíšťové boreliózy. Ale pokud jsou výsledky testů negativní a onemocnění zůstává podezřelé, stejně jako s rozvojem klinických příznaků, doporučuje se krevní test pacientů. V tomto případě je možné stanovit protilátky tříd IgM a/nebo IgG proti antigenům patogenů, stejně jako identifikovat genetický materiál patogenů pomocí metody PCR.

K čemu slouží výzkum?

• Pro komplexní laboratorní diagnostiku klíšťové encefalitidy a/nebo systémové klíšťové boreliózy;
• k určení úrovně infekce studovaných klíšťat;
• stanovit obsah genetického materiálu patogenů klíšťové encefalitidy a/nebo systémové klíšťové boreliózy u studovaných klíšťat;
• zjistit možnou nákazu klíštětem za účelem včasné diagnostiky onemocnění, mimořádné specifické prevence a cílené patogenetické léčby;
• zjistit přítomnost a procento infekce klíšťaty ve studované oblasti v přirozených ohniscích a v období hmyzu.

Kdy je studium naplánováno?

• Při vyšetření klíštěte po kousnutí člověka, rozdrcení zapuštěného hmyzu, odstranění klíštěte, a to i ve specializované nemocnici;
• při vyšetření klíštěte za účelem diagnostiky genetického materiálu původců klíšťové encefalitidy a/nebo systémové klíšťové boreliózy;
• při vyšetřování klíšťat za účelem zjištění přítomnosti a procenta infekce klíšťaty ve studované oblasti v přirozených ohniscích a v období hmyzu.

Co znamenají výsledky?

Referenční hodnoty: negativní.

Důvody pro pozitivní výsledek:

• infekce testovaného klíštěte virem klíšťové encefalitidy;
• infekce testovaného klíštěte původcem systémové klíšťové boreliózy;
• infekce testovaného klíštěte virem klíšťové encefalitidy a systémové klíšťové boreliózy.

Důvody negativního výsledku:

• nepřítomnost infekce testovaného klíštěte virem klíšťové encefalitidy a/nebo systémovou klíšťovou boreliózou;
• obsah patogenu v testovaném materiálu je pod úrovní detekce;
• falešně negativní výsledky.

Důležité poznámky

Při podezření na přítomnost klíšťové encefalitidy a/nebo systémové klíšťové boreliózy, ale jsou-li výsledky testů negativní, je doporučen krevní test pacientů. V tomto případě je možné stanovit protilátky tříd IgM a/nebo IgG proti antigenům patogenů, stejně jako identifikovat genetický materiál patogenů pomocí metody PCR.

Kdo si studium objedná?

Specialista na infekční choroby, virolog, parazitolog, epidemiolog.

Také doporučeno

[02-029] Klinický krevní test: obecná analýza, počet leukocytů, ESR (s mikroskopií krevního nátěru k detekci patologických změn)

[07-092] Virus klíšťové encefalitidy, IgM

[07-093] Virus klíšťové encefalitidy, IgG

[07-095] Virus klíšťové encefalitidy, antigen (v mozkomíšním moku)

[06-060] Celkový protein v mozkomíšním moku

[06-061] Glukóza v mozkomíšním moku

[07-062] Borrelia burgdorferi, IgM, titr

[07-064] Borrelia burgdorferi, IgG, titr

[09-039] Borrelia burgdorferi sl, DNA [PCR] [40-174] Sérologická diagnostika klíšťové boreliózy a encefalitidy

Literatura

1. Wang G, Liveris D, Brei B, Wu H, Falco RC, Fish D, Schwartz I. PCR v reálném čase pro současnou detekci a kvantifikaci Borrelia burgdorferi v klíšťatech Ixodes scapularis odebraných v terénu ze severovýchodních Spojených států / Appl Environ Microbiol. 2003 srpen;69(8):4561–5.

2. Pancewicz SA, Garlicki AM, Moniuszko-Malinowska A, Zajkowska J, Kondrusik M, Grygorczuk S, Czupryna P, Dunaj J Diagnostika a léčba nemocí přenášených klíšťaty doporučení Polské společnosti epidemiologie a infekčních nemocí. Polská společnost epidemiologie a infekčních nemocí / Przegl Epidemiol. // 2015;69(2):309-16, 421–8.

3. Virologické studium jednotlivých vzorků klíšťat ixodidů pomocí metod mikroanalýzy. Směrnice.

4. Tkachev S. E., Livanova N. N., Livanov S. G. Studie genetické diverzity viru klíšťové encefalitidy sibiřského genetického typu identifikovaného u klíšťat Ixodes persulcatus na Severním Uralu v roce 2006 / Siberian Scientific Medical Journal, č. 4 (126) – 2007.

5. Pokrovsky V.I., Tvorogova M.G., Shipulin G.A. Laboratorní diagnostika infekčních onemocnění. Adresář / M.: BINOM. – 2013.

6. Šuvalová E.P. Infekční nemoci / M.: Medicína. – 2005. – 696 s.