Listy kopřivy Urticae dioicaе folia

Sbírá se během rašení a kvetení, sušené listy divoké a pěstované vytrvalé byliny kopřiva dvoudomé – Urtica dioica L., fam. kopřivy – Urticaceae.

Vnější znaky. Celá surovina. Listy jsou celé nebo částečně rozdrcené, jednoduché, řapíkaté, až 20 cm dlouhé, až 9 cm široké, vejčitě kopinaté a široce vejčité s ostrým vrcholem a srdčitou bází; Okraj je ostrý a hrubě vroubkovaný se zuby zahnutými směrem nahoru. Při zkoumání suroviny pod lupou (10x) nebo stereomikroskopem (16x) je zřejmé, že listová čepel je z obou stran pokryta krátkými jednobuněčnými chloupky s ostrou špičkou (retortovitá), takže je na dotek drsná. Na spodní straně a podél žil jsou navíc chloupky s mnohobuněčnou bází a dlouhou koncovou buňkou (bodavou). Cystolity jsou bělavé, zaoblené a eliptické útvary na tmavě zeleném pozadí.

Listové řapíky jsou až 8 cm dlouhé, na průřezu kulaté nebo polokulaté s rýhou na horní straně, pokryté hustě tuhými retortovitými chlupy a žahavými chlupy nebo jejich bázemi.

Plodem je ořech vejčitého nebo eliptického tvaru, v různém stupni zralosti od zelené, žlutozelené až po světle hnědou.

Barva listů na horní straně je od zelené po tmavě zelenou, na spodní straně je světlejší – šedozelená nebo zelená; řapíky – zelené, žlutozelené nebo šedozelené. Vůně je slabá. Chuť vodného extraktu je hořká.

Drcené suroviny. Směs kousků listových čepelí, řapíků, vzácně květních stonků, stonků, jednotlivých květů a semen, procházející sítem s otvory 7 mm.

Při zkoumání pod lupou (10x) nebo stereomikroskopem (16x) jsou patrné kousky listových čepelí od zelené až po tmavě zelenou barvu s bělavě zaoblenými a elipsovitými cystolity, s malými vyčnívajícími retortovitými chloupky, s polámanými, vzácně celými žahavými chloupky nebo jejich miskovitými bázemi a protáhlými četnými retortovitými chloupky podél chloupků, zejména žilkami.

Viditelné jsou kusy řapíků, kulatého nebo půlkruhového průřezu, s rýhou, hustě pýřité s retortovitými chlupy a vzácněji žahavými chlupy nebo jejich bázemi. Vzácně se nalézají oválná semena se špičatou špičkou, velká asi 1 mm, od světle zelené až po světle hnědou barvu, květy nebo jejich části jsou drobné, jednopohlavné s jednoduchým čtyřdílným zeleným okvětím, hustě pýřité kousky stopek, kousky podélně rozštěpených stonků s bílým nebo žlutobílým jádrem a vnějším povrchem zelené, žlutavé nebo zeleno-zeleno-zeleno-hnědé oříškové barvy.

Barva drcených surovin je od zelené po tmavě zelenou s šedozelenými, bílými, žlutobílými a hnědými inkluzemi. Vůně je slabá. Chuť vodního extraktu je hořká.

Prášek. Směs kousků listových čepelí, řapíků, vzácně květních stonků, stonků, jednotlivých květů (nebo jejich částí) a semen, která projdou sítem s otvory 2 mm.

Při zkoumání pod lupou (10x) nebo stereomikroskopem (16x) jsou patrné: kousky listové čepele s krátkými retortovitými chlupy a zbytky dlouhých retortovitých a žahavých chlupů, kousky řapíků a velké listové žilky s chlupy a jejich zbytky; vzácně se vyskytují: oválná semena se špičatou špičkou, velká asi 1 mm, malé (asi 2 mm v průměru) celé světle zelené květy nebo jejich části, lístky periantu, hustě pýřité kousky stopek, kousky podélně rozštěpených stonků, plody vejčitého nebo eliptického tvaru ořechu.

Barva prášku se pohybuje od šedozelené po tmavě zelenou, s bělavými, nahnědlými a nažloutlými inkluzemi. Vůně je slabá. Chuť vodného extraktu je hořká.

Poznámka. Mezi nepřijatelné nečistoty patří:

a) Kopřiva dvoudomá (Urticaurens L.) je jednoletá rostlina pokrytá žahavými chlupy s přímou nebo vystoupavou 4strannou lodyhou na bázi. Listy jsou opačné, na dlouhých řapících, které jsou téměř stejné nebo mírně kratší než čepel. Vejčité nebo eliptické, krátce špičaté, na bázi široce klínovité, méně často zaoblené, na okrajích hrubě ostře pilovité, 2-5 cm dlouhé a 1,5-3,5 cm široké. Palisty jsou malé, kopinaté. Květiny jsou jednodomé. Oba jsou shromážděny ve zlomených, rozvětvených klasech vycházejících z paždí listů.

b) Kopřiva konopná (Urticacannabina L.) je vytrvalá bylina vysoká 70-120 cm, s rýhovanými, vzpřímenými lodyhami, obvykle nevětvenými, 4strannými, pokrytými žahavými a drobnými jednoduchými chloupky. Listy jsou 7-5 cm dlouhé a 6-12 cm široké, hluboce 3-5-členité se zpeřenými řezy. Květy jsou jednodomé nebo dvoudomé.

c) Netýkavka bílá (Lamiumalbum, čeleď Lamiaceae) – lodyhy 20-100 cm vysoké, rovné, jednoduché nebo větvené, většinou jednotlivé, pokryté jednotlivými dolů vychýlenými chlupy. Listy jsou 2-10 cm dlouhé, vejčité, na bázi mělce srdčité, horní jsou dlouze špičaté, po okraji pilovitě zubaté, řídce chlupaté, na řapících. Květy v přeslenech, umístěné v paždí listů. Listeny jsou čárkovité, 3-6krát kratší než sepaly. Misky jsou řídce chlupaté, jejich zuby jsou delší než rourky, tence a dlouze špičaté. Koruny 2-2,5 cm dlouhé, nažloutlé, špinavě bílé, občas bělavě růžové; Horní ret je zvenčí chlupatý.

Mikroskopické rysy. Celá surovina. Při zkoumání listu z povrchu by mělo být zřejmé, že buňky horní epidermis jsou polygonální s rovnými nebo mírně zvlněnými stěnami a spodní s vysoce zvlněnými stěnami. Průduchy jsou umístěny převážně na spodní straně listu a jsou obklopeny 3-5 epidermálními buňkami (anomocytární typ). V některých buňkách epidermis jsou podlouhle zaoblené krystalické inkluze (cystolity) s granulární strukturou a malou skvrnou uprostřed – průsvitnou stopkou. Na obou stranách listu jsou 3 typy chlupů: žahavé, retortovité a chlupy. Bodavé chloupky jsou buňka, která je na jedné straně rozšířena do dutého, tenkého, dlouhého konce v podobě jehlice s hrotem zakončeným snadno odlomitelnou hlavičkou a na druhé straně je rozšířena do podlouhlé elipsovité dutiny (tobolky), ponořené do mnohobuněčné základny – podpory epidermálních buněk. Retortové chlupy jsou jednobuněčné, se zaoblenou, rozšířenou základnou, mírně ponořené do epidermis a s prodlouženou špičatou špičkou. Chlupy hlavy jsou malé s dvou-, méně často tříbuněčnou kulovitou hlavou na jednobuněčné stopce.

Cévy velkých žil a řapíku („rozdrcený“ přípravek) jsou doprovázeny drobnými drúzami, které tvoří charakteristické řetízky.

Drcené suroviny. Při zkoumání kousků listů z povrchu by měly být viditelné polygonální epidermální buňky s rovnými, mírně stočenými nebo silně stočenými stěnami. Průduchy anomocytárního typu jsou umístěny převážně na jedné straně listové čepele. V některých buňkách epidermis jsou podlouhlé zaoblené cystolity s granulární strukturou a malou skvrnou uprostřed – průsvitnou stopkou. Chlupy nebo jejich úlomky na obou stranách listu jsou 3 typů: retortovité, žahavé, hlavy.

Cévy velkých žil a řapíku („rozdrcený“ přípravek) jsou doprovázeny drobnými drúzami, které tvoří charakteristické řetízky.

Prášek. Při zkoumání práškových mikropreparátů pod mikroskopem by měly být viditelné: úlomky listů s epidermis tvořenou buňkami s vlnitými nebo rovnými stěnami; průduchy anomocytárního typu; Cystolity se často nacházejí ve formě podlouhlých, kulatých a nepravidelně tvarovaných útvarů zrnité struktury, v jejichž středu je zpravidla jasně viditelná základna stonku ve formě kruhu; Existují 3 typy chlupů: retortový tvar, bodavý a capitate; retortové chlupy jsou jednobuněčné, s rozšířenou bází a nacházejí se jak ve formě fragmentů, tak neporušené; žahavé chlupy, sestávající z mnohobuněčné báze a do ní ponořené velké koncové buňky se snadno odlomitelnou hlavičkou, nalézáme častěji zlomené; Méně časté jsou drobné chlupaté chlupy s dvou- nebo tříbuněčnou hlavou na jednobuněčné stopce.

Někdy jsou podél cév úlomky pletiv řapíků a velkých žil s řetízky drobných drúz šťavelanu vápenatého, které mají spirálovité sekundární ztluštění stěn.

Stanovení hlavních skupin biologicky aktivních látek

Standardní vzorek (SS) roztok kyseliny chlorogenové. Asi 0,02 g kyseliny chlorogenové CO se rozpustí ve 25 ml 96% alkoholu a míchá. Doba použitelnosti roztoku je 3 měsíce. při skladování v těsně uzavřené nádobě na chladném a tmavém místě.

Roztok vitaminu CO. Asi 0,02 g vitaminu CO se rozpustí ve 25 ml hexanu a míchá. Skladovatelnost roztoku je 30 dní při skladování v dobře uzavřeném obalu na chladném a tmavém místě.

1. Asi 1,0 g suroviny rozdrcené na velikost částic procházející sítem s otvory 0,2 mm se vloží do kuželové baňky s plochým dnem o objemu 50 ml, přidá se 10 ml 96% lihu a zahřívá se zpětným chladičem ve vodní lázni po dobu 15 minut. Obsah baňky se poté ochladí a zfiltruje přes papírový filtr. Výsledný filtrát se suší ve vakuu při teplotě 40 °C do sucha. K suchému zbytku se přidají 2 ml 96% alkoholu (zkušební roztok).

10 ul zkušebního roztoku a 5 ul roztoku kyseliny chlorogenové se nanese na startovací čáru analytické chromatografické desky s vrstvou silikagelu. Destička s nanesenými vzorky se suší na vzduchu po dobu 5-10 minut, umístí se do komory předem nasycené na 30 minut směsí rozpouštědel bezvodá kyselina mravenčí – methanol – ethylacetát (2,5:4:50) a chromatografuje se vzestupným způsobem. Když čelo rozpouštědla překročí asi 80-90 % délky desky od startovní čáry, vyjme se z komory, suší se, dokud se neodstraní stopy rozpouštědel, zahřívá se v sušicí skříni na 100-105 °C po dobu 3-5 minut, zpracuje se s 1% roztokem aminoethyletheru kyseliny difenylboronové v 96% alkoholu a pozoruje se v UV světle při vlnové délce 365 nm.

Chromatogram roztoku kyseliny chlorogenové by měl vykazovat adsorpční zónu s intenzivní modro-světle modrou fluorescencí.

Chromatogram zkušebního roztoku by měl vykazovat adsorpční zónu s intenzivní modro-světle modrou fluorescencí na úrovni zóny na chromatogramu roztoků kyseliny chlorogenové a adsorpční zónu s intenzivní modrou fluorescencí nad zónou kyseliny chlorogenové; detekce dalších adsorpčních zón (fenolických sloučenin) je povolena.

2. Asi 1,0 g suroviny rozdrcené na velikost částic procházejícím sítem s otvory 0,25 mm se vloží do kónické baňky s plochým dnem o objemu 50 ml, přidá se 10 ml hexanu a míchá se na mechanické třepačce po dobu 3 hodin, poté se filtruje přes papírový filtr, rozpouštědlo se neoddestiluje na rotační odparce při teplotě vody 45°C na teplotě 2°C na rotační odparce. 3 ml (zkušební roztok).

100 ul testovaného roztoku a 10 ul roztoku vitaminu CO se nanese na startovací čáru analytické chromatografické desky s vrstvou silikagelu. Destička s nanesenými vzorky se suší na vzduchu při teplotě místnosti po dobu 5-10 minut, umístí se do komory předem nasycené na 30 minut horní vrstvou směsi rozpouštědel hexan-chloroform (8:3) a chromatografuje se vzestupným způsobem. Když čelo rozpouštědla prošlo přibližně 80-90 % délky destičky od startovní čáry, vyjme se z komory, suší se, dokud nejsou odstraněny stopy rozpouštědel, a pozoruje se pod UV světlem při vlnové délce 365 nm po dobu alespoň 2 minut.

Chromatogram roztoku vitaminu CO by měl vykazovat adsorpční zónu se žlutozelenou fluorescencí.

Chromatogram zkušebního roztoku by měl vykazovat hlavní adsorpční zónu se žlutozelenou fluorescencí na úrovni adsorpční zóny vitaminu K1; detekce dalších adsorpčních zón je povolena.

Vlhkost. Celé suroviny, drcené suroviny, prášek – ne více než 14%.

Popel obecný. Celé suroviny, drcené suroviny, prášek – ne více než 20%.

Popel, nerozpustný v kyselině chlorovodíkové. Celé suroviny, drcené suroviny, prášek – ne více než 2%.

Mletí surovin. Celé suroviny: částice procházející sítem s otvory o velikosti 3 mm – ne více než 5%. Drcené suroviny: částice, které neprojdou sítem s otvory o velikosti 7 mm – ne více než 5%; částice procházející sítem s otvory o velikosti 0,18 mm – ne více než 5%. Prášek: částice, které neprojdou sítem s otvory o velikosti 2 mm – ne více než 5 %; částice procházející sítem s otvory o velikosti 0,18 mm – ne více než 5%.

Suroviny, které změnily barvu (ztmavly a zčernaly). Celé suroviny, drcené suroviny – ne více než 5%.

Ostatní části rostliny (stonky, květenství atd.). Celé suroviny, drcené suroviny – ne více než 5%.

Organická nečistota. Celé suroviny, drcené suroviny – ne více než 2%.

Minerální nečistota. Celé suroviny, drcené suroviny, prášek – ne více než 1%.

Těžké kovy a arsen. V souladu s požadavky monografie Všeobecného lékopisu „Stanovení obsahu těžkých kovů a arsenu v léčivých rostlinných materiálech a léčivých rostlinných přípravcích“.

Radionuklidy. V souladu s požadavky monografie Všeobecného lékopisu „Stanovení obsahu radionuklidů v léčivých rostlinných materiálech a léčivých rostlinných přípravcích“.

Zbytky pesticidů. V souladu s požadavky monografie Všeobecného lékopisu „Stanovení obsahu zbytkových pesticidů v léčivých rostlinných materiálech a léčivých rostlinných přípravcích“.

Mikrobiologická čistota. V souladu s požadavky monografie všeobecného lékopisu „Mikrobiologická čistota“.

Kvantitativní stanovení. Celá surovina, drcená surovina, prášek: součet hydroxyskořicových kyselin z hlediska kyseliny chlorogenové není menší než 0,3 %.

Analytický vzorek surovin se mele na velikost částic, které projdou sítem s otvory 1 mm. Do baňky s kulatým dnem se zábrusem o objemu 0,5 ml se vloží asi 250 g (přesná hmotnost) rozdrcené suroviny, přidá se 50 ml 70% lihu. Baňka s obsahem je připojena k zpětnému chladiči a zahřívána ve vodní lázni po dobu 30 minut za periodického protřepávání, aby se ze stěn smyly částice suroviny. Po ochlazení se extrakt přefiltruje přes papírový filtr do odměrné baňky na 100 ml. Extrakce se ještě jednou opakuje za výše popsaných podmínek. Výsledný extrakt se přefiltruje do stejné odměrné baňky. Spojené extrakty v odměrné baňce se doplní 70% lihem po značku a promísí (roztok A).

2,0 ml roztoku A se přelije do 25 ml odměrné baňky, objem roztoku se doplní po značku lihem 96 % a promíchá se (roztok B). Optická hustota roztoku B se měří na spektrofotometru při vlnové délce 330 nm v kyvetě s tloušťkou vrstvy 10 mm. Jako srovnávací roztok se používá 96% alkohol.

Obsah součtu oxyskořicových kyselin ve smyslu kyseliny chlorogenové v absolutně suchých surovinách v procentech (X) se vypočítá pomocí vzorce:

kde A je optická hustota roztoku B;

— specifický absorpční index kyseliny chlorogenové při vlnové délce 330 nm, rovný 507;

— hmotnost surovin, g;

W – vlhkost suroviny, %.

Balení, etiketování a doprava. V souladu s požadavky monografie Všeobecného lékopisu „Balení, označování a přeprava léčivých rostlinných surovin a léčivých rostlinných přípravků“.

Úložný prostor. V souladu s požadavky monografie Všeobecného lékopisu „Skladování léčivých rostlinných surovin a léčivých bylinných přípravků“.