Analýza infekce kočičím koronavirem (PCR), č. AN330BTK pro domácí mazlíčky, kočky a psy v Moskvě

Původcem enteritidy (Feline coronavirus enteritis) a infekční peritonitidy (Feline Infectious Peritonitis, FIP) u koček je jednovláknový RNA virus z čeledi Coronaviridae (FCoV). Na základě sérologických a genomických rozdílů se rozlišují dva typy: FCoV typu I je nejčastější, FCoV typu II je méně častý a jde o rekombinantní formu mezi FCoV typu I a psím koronavirem.

Koronavirus postihuje kočky domácí, séropozitivní mohou být i jiné druhy koček žijících v přírodě. Nemoc se vyskytuje všude. Hlavním zdrojem viru jsou výkaly infikovaných zvířat, kde se patogen objeví týden po infekci. Virus se uvolňuje z těla infikované kočky do vnějšího prostředí během několika týdnů a měsíců je zaznamenáno celoživotní přenášení, během kterého je zaznamenána zvýšená koncentrace patogenu ve výkalech. Virus může přežít ve vnějším prostředí jeden nebo dva dny, někdy až 7 týdnů, a přenáší se kontaminovanými podnosy, botami, oblečením a rukama.

Je důležité pochopit, že u jedné z devíti koček infikovaných koronavirem se může vyvinout FIP. Mezi faktory, které vyvolávají rozvoj této progresivní a zpravidla nevyléčitelné choroby, patří plemeno (habešský, australský kouřový, bengálský, barmský, barmský, britský krátkosrstý, himálajský, ragdoll, rex a skotský Fold), stáří zvířete do rok a více 10 let, stresové situace.

Většina koček infikovaných FCoV buď zůstane zdravá, nebo se u nich rozvine mírná enteritida. Primární infekce trvá 7–18 měsíců a může vést k a) uzdravení, b) trvalému vylučování FCoV; c) opakovaná izolace FCoV. Reinfekce je poměrně běžná, když jsou kočky drženy pohromadě.

Po primární nebo sekundární infekci se u koťat výrazně častěji objevují klinické příznaky FIP a intenzita vylučování viru je výrazně vyšší ve srovnání s dospělými zvířaty. Imunosuprese způsobená virem a dalšími faktory podporuje replikaci a intenzivní uvolňování FECV.

Infekce FECV je zaznamenána po vyrovnání mateřských protilátek u koťat ve 4-8 týdnech života. Onemocnění se může rozvinout několik týdnů po infekci, ale častěji po 6-18 měsících. Systémová zánětlivá pyogranulomatóza se obvykle rozvíjí 6-18 měsíců po infekci. Klinické příznaky FIP se často v čase mění a závisí na poškození některých orgánů a převaze zánětlivých nebo exsudativních procesů. Vyznačuje se letargií, nedostatkem chuti k jídlu, periodickou horečkou, která není přístupná antibiotické terapii, zvýšenou žízní a polyurií. Mohou se tvořit pleurální nebo břišní výpotky. FIP tvoří přibližně 10 % perikardiálních výpotků u koček a je třetí nejčastější příčinou perikardiálních výpotků u koček po kardiomyopatii a neoplazii. V některých případech může perikardiální výpotek způsobit srdeční tamponádu. Pyogranulomatózní nebo granulomatózní zánětlivé procesy způsobují mezenterickou lymfadenopatii, renomegalii, vývoj střevních novotvarů, hepatomegalii, žloutenku, pneumonii, uveitidu, choriorenitidu. Až 10 % koček s FIP má neurologické příznaky, jako jsou lokalizované a generalizované záchvaty, které jsou způsobeny především meningoencefalitidou, meningomyelitidou, ependymitidou a obstrukčním hydrocefalem. V některých případech je zaznamenána těžká anémie způsobená imunitně zprostředkovanou hemolýzou nebo mikroangiopatií.

Konečná diagnóza FIP je stanovena až na základě výsledku imunohistochemického barvení koronavirového antigenu v přítomnosti pyogranulomatózní nebo granulomatózní vaskulitidy. Vzhledem k obtížnosti získávání biopsií u koček s FIP je antemortem diagnostika infekce často založena na anamnéze, klinickém vyšetření a laboratorních nálezech a vyloučení jiných možných příčin onemocnění. Vzhledem k tomu, že tvorba výpotků je charakteristickým znakem onemocnění, je nutné získat vhodné vzorky a prostudovat je. Výsledky vyšetření výpotku mohou být informativnější než výsledky krevního testu.

Reverzní transkripční PCR testovací systémy byly vyvinuty pro detekci FCoV, ale nerozlišují mezi virulentními a avirulentními kmeny viru. Protože avirulentní kmeny lze nalézt v krvi a dalších tkáních koček, které postrádají FIP, detekce viru pouze v gastrointestinálním traktu je diagnostická. Je možné získat falešně negativní výsledky z testu PCR při nízké koncentraci viru v testovaném vzorku nebo v důsledku destrukce virové RNA při dlouhodobém skladování. Pro diagnostiku FIP bude klinicky významný průkaz virové RNA ve výpotkové tekutině při exsudativní formě infekce.

Příprava pacienta

• před zákrokem musí být zvíře drženo na 10-12hodinové dietě;
• Před provedením zásahu je nutné oholit chloupky a ošetřit pokožku odpovídající oblasti antiseptickým roztokem.

Indikace pro léčbu

• ospalost;
• anorexie;
• ztráta hmotnosti nebo nedostatek přírůstku hmotnosti u mladých zvířat;
• zvýšení teploty;
• žloutenka;
• ascites a/nebo pleurální výpotek;
• neurologické příznaky;
• poškození orgánů zraku.

Kontraindikace:

• riziko krvácení během biopsie formací s dutinou;
• riziko významného krvácení se zvyšuje, pokud má zvíře závažnou trombocytopenii nebo jiné koagulopatie;
• kontraindikace před celkovou anestezií, podle stupně posouzení rizikové skupiny zvířete.

I když jsou rizika tohoto postupu minimální, majitel by měl být upozorněn, že biopsie tkáně s sebou nese možnost krvácení nebo jiných komplikací v závislosti na oblasti a povaze odebrané tkáně.

Metody výběru biomateriálů

• Před biopsií povrchových lymfatických uzlin je indikována lokální anestezie (např. lidokain), případně v kombinaci se sedací;
• Při provádění jehlové biopsie lymfatických uzlin v dutině břišní pod ultrazvukovým vedením je indikována intenzivní sedace nebo lehká anestezie.

Provedení biopsie obvykle vyžaduje zapojení dvou specialistů: jeden, který zvíře omezí, zajistí monitorování sedace nebo anestezie a pomůže při zpracování vzorku, a druhý, aby vzorek získal.

• Odběr biomateriálu během operace.

Předanalýza: Důležité! Velikost tkáně umístěné v mikrozkumavce s transportním médiem by neměla přesáhnout tyto rozměry: 0,5×0,5×0,5 cm.

• provést operativní/pitevní excizi fragmentu tkáně.
• Bioptický vzorek vložte do mikrozkumavky s transportním médiem a pevně ji uzavřete víčkem, dokud nezaklapne.
• Mikrozkumavku zmrazte ve svislé poloze na -17°C…-23°С.
• Vyplňte všechna pole ve formuláři doporučení.
• Skladování vzorků je 1 měsíc při -17°C…-23°C.
• Teplotní režim pro transport do laboratoře je -17°C. -23°С (červený balíček).

Interpretace výsledku: Výsledky studie obsahují informace výhradně pro lékaře. Diagnóza se provádí na základě komplexního posouzení různých ukazatelů, dalších informací a závisí na diagnostických metodách.

Formát výsledku: kvalitativní metoda. Detekce nebo nedetekce FCoV RNA v testovaném vzorku.

1. de Vries AAF, Horzinek MC, Rottier PJM, de Groot RJ. Organizace genomu nidovirů: podobnosti a rozdíly mezi arteri-, toro- a koronaviry. Semin Virol 1997; 8:33–47.
2. Addie DD, Schaap IA, Nicolson L, Jarrett O. Přetrvávání a přenos přirozené infekce kočičím koronavirem typu I. J Gen Virol 2003; 84:2735–44.
3. Hartmann K, Binder C, Hirschberger J, a kol. Porovnání různých testů k diagnostice kočičí infekční peritonitidy. J Vet Intern Med 2003; 17: 781–90.
4. Kass PH, Dent TH. Epidemiologie kočičí infekční peritonitidy. Feline Pract 1995; 23:27–32.
5. Cave TA, Thompson H, Reid SWJ, Hodgson DR, Addie DD. Úmrtnost koťat ve Spojeném království: retrospektivní analýza 274 histopatologických vyšetření (1986–2000). Vet Rec 2002; 151:497-501.